國家藥監(jiān)局醫(yī)療器械注冊(cè)審評(píng)中心發(fā)布《定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(征求意見稿)》,向大眾公開征求意見,我們一起來看一下。
引言:國家藥監(jiān)局醫(yī)療器械注冊(cè)審評(píng)中心發(fā)布《定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(征求意見稿)》,向大眾公開征求意見,我們一起來看一下。
各有關(guān)單位:
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局2019年度醫(yī)療器械注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則制修訂計(jì)劃的有關(guān)要求,我中心組織起草了《定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》。經(jīng)文獻(xiàn)匯集、企業(yè)調(diào)研、專題研討和專家討論,形成了征求意見稿。
為使該指導(dǎo)原則更具有科學(xué)合理性及實(shí)際可操作性,即日起在網(wǎng)上公開征求意見,衷心希望相關(guān)領(lǐng)域的專家、學(xué)者、管理者及從業(yè)人員提出意見或建議,推動(dòng)指導(dǎo)原則的豐富和完善。
請(qǐng)將意見或建議以電子郵件的形式于2019年10月20日前反饋我中心。
聯(lián)系人:韓昭昭、史裕英
電話:010-86452876、010-86452879
電子郵箱:hanzhzh@cmde.org.cn、shiyy@cmde.org.cn
附件:1.定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則(征求意見稿)(下載)
2.反饋意見表(下載)國家藥品監(jiān)督管理局
醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心
2019年9月25日
附件1
定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)
審查指導(dǎo)原則
(征求意見稿)
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)醫(yī)療器械注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫,同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)定性檢測(cè)試劑性能評(píng)估的一般要求,申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用,若不適用,需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù),并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申報(bào)產(chǎn)品已有適用的指導(dǎo)原則,具體性能研究建議參照其相應(yīng)的指導(dǎo)原則進(jìn)行。
本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件,但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng),亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行,如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法,也可以采用,但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料,相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的,隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則所述定性檢測(cè)試劑是指僅提供兩種檢測(cè)結(jié)果(即陽性/陰性或有/無)的體外診斷試劑。包括:無量值報(bào)告的檢測(cè)試劑和基于量值檢測(cè)后通過閾值判斷結(jié)果的檢測(cè)試劑。對(duì)于結(jié)果報(bào)告為陰性、1+、2+或3+的分等級(jí)報(bào)告或滴度的半定量檢測(cè)試劑,不適用于本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則適用于基于所有方法學(xué)的定性檢測(cè)試劑,包括核酸擴(kuò)增技術(shù)、標(biāo)記免疫分析技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)等。
本指導(dǎo)原則適用于所有預(yù)期用途的定性檢測(cè)試劑,包括:篩查試劑、診斷試劑和確認(rèn)/確證試劑。
本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè)和許可事項(xiàng)變更的性能評(píng)估,包括申報(bào)資料中的部分要求,其他未盡事宜,應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》(國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào),以下簡(jiǎn)稱《辦法》)等相關(guān)法規(guī)要求。
二、技術(shù)審查要點(diǎn)
主要原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)后,在有效質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的質(zhì)量穩(wěn)定的體外診斷試劑產(chǎn)品,方可進(jìn)行性能評(píng)估,用于注冊(cè)申報(bào)。在注冊(cè)申報(bào)資料中,不得采用原材料研究階段和實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段生產(chǎn)的批次試劑進(jìn)行分析性能評(píng)估。
如試劑用于不同適用機(jī)型,需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評(píng)估。但并不意味著,每個(gè)適用機(jī)型均采用相同的性能評(píng)估試驗(yàn)方案,對(duì)于某些性能,可采用主機(jī)型進(jìn)行充分的性能研究,其他機(jī)型采用驗(yàn)證的試驗(yàn)方案進(jìn)行,具體要求見(二)具體要求。但對(duì)于主機(jī)型的判斷,應(yīng)有充分依據(jù)。
如試劑包括不同包裝規(guī)格,需對(duì)不同包裝規(guī)格間的差異進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同規(guī)格間存在性能差異,需采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行性能評(píng)估;如不存在性能差異,需要詳細(xì)說明不同規(guī)格間的差別。
進(jìn)行分析性能評(píng)估所采用的樣本/樣本基質(zhì)應(yīng)盡量與預(yù)期適用的臨床真實(shí)樣本一致??蔀轭A(yù)期人群樣本、樣本庫樣本、參考樣本(盤)、從類似病史患者獲取的混合樣本等。如無法獲得預(yù)期適用的樣本,應(yīng)說明原因。可使用稀釋或者經(jīng)處理去除分析物獲得低濃度樣本、添加分析物獲得高濃度樣本等人工制備的樣本。在采用人工制備樣本時(shí),如需對(duì)臨床樣本進(jìn)行稀釋,可采用低濃度的臨床樣本或經(jīng)驗(yàn)證基質(zhì)效應(yīng)的稀釋液;如需對(duì)臨床樣本添加分析物,加入量應(yīng)盡可能少,原則上少于總體積的10%;如需對(duì)臨床樣本中添加干擾/交叉物質(zhì),應(yīng)盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品(加入體積不超過5%)或純品。如無法獲得真實(shí)樣本或真實(shí)樣本成分較復(fù)雜,存在大量干擾物(如痰液)時(shí),可考慮使用標(biāo)準(zhǔn)菌(毒)株、臨床分離培養(yǎng)物。
用于性能研究的樣本,應(yīng)按照說明書聲稱的采集、保存、運(yùn)輸和處理方式進(jìn)行。同時(shí)應(yīng)考慮到不同樣本保存液、不同采樣器、不同處理方法(如核酸的提取與純化、抗原修復(fù)條件等)對(duì)檢測(cè)結(jié)果可能造成的影響。具體闡述不同影響因素之間的差別及可能產(chǎn)生的影響,并對(duì)可能產(chǎn)生影響的性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。
分析性能評(píng)估一般應(yīng)包括適用的樣本類型、準(zhǔn)確度、精密度、分析靈敏度,分析特異性、高劑量鉤狀效應(yīng)/前帶效應(yīng)、陽性判斷值、方法學(xué)比對(duì)等。以下主要針對(duì)定性試劑的上述共性項(xiàng)目進(jìn)行闡述。
1.適用的樣本類型
如果試劑適用于多種樣本類型,應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每個(gè)樣本類型的適用性。對(duì)于可比樣本,可采用同源比對(duì)的方法進(jìn)行驗(yàn)證;對(duì)于不可比樣本,應(yīng)對(duì)每個(gè)樣本類型分別進(jìn)行性能評(píng)估。如果樣本的采集、制備或處理方式存在差別,應(yīng)分析這些差別的潛在影響,并進(jìn)行針對(duì)性的性能驗(yàn)證
如試劑可用于不同適用機(jī)型,可分析各機(jī)型在適用樣本類型的差別,如無明顯差別,可僅采用一個(gè)主機(jī)型進(jìn)行適用的樣本類型的研究。
2.準(zhǔn)確度
申請(qǐng)人可選擇下述兩種方式進(jìn)行準(zhǔn)確度研究。
2.1方法學(xué)比對(duì)
方法學(xué)比對(duì)指采用與診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)或同類已上市產(chǎn)品,檢測(cè)同一套樣本的方式,比較檢測(cè)結(jié)果的差異。
樣本應(yīng)選擇預(yù)期人群的新鮮樣本,或參考樣本盤,并注意包含不同水平/型別待測(cè)靶物質(zhì),且包含干擾及交叉樣本。此處所述參考樣本盤指,已經(jīng)診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)/其他成熟方法檢測(cè)確認(rèn)過的,或有準(zhǔn)確臨床診斷信息的,由多份臨床樣本組成的一套樣本。
2.2參考品(盤)的檢測(cè)
通過檢測(cè)參考品(盤)分析申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果與經(jīng)確認(rèn)結(jié)果的符合情況,評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確度。此處所述參考品(盤)指已經(jīng)診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)/其他成熟方法檢測(cè)確認(rèn)過的,或有準(zhǔn)確臨床診斷信息的,由多份樣本組成的一套樣本。參考品(盤)可以為商用來源,企業(yè)亦可自行建立。
應(yīng)注意參考品(盤)對(duì)各種常見型別/流行株的覆蓋和對(duì)所有檢測(cè)位點(diǎn)的覆蓋,包含不同來源、不同濃度水平的臨床樣本/臨床混合樣本和菌株/毒株。建議參考品(盤)還應(yīng)包含不含待測(cè)靶物質(zhì)的健康人樣本、干擾及交叉樣本等。對(duì)于臨床罕見樣本可采用細(xì)胞系或構(gòu)建樣本作為參考品(盤)的組成,但應(yīng)注意樣本基質(zhì)與臨床樣本的一致性?;蛱峤粯?gòu)建樣本與臨床真實(shí)樣本的一致性研究分析。
3.精密度
3.1 重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性
精密度研究應(yīng)考慮到運(yùn)行內(nèi)的變異和運(yùn)行間、日內(nèi)、日間、批次間、操作者間、儀器間和地點(diǎn)間的變異。一般而言,精密度包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性。重復(fù)性又稱批內(nèi)精密度,表示上述影響因素變化最小的情況(上述影響因素均不變),即相同操作者、相同試劑、相同操作條件、相同設(shè)備、相同地點(diǎn),并在短時(shí)間段內(nèi)完成檢測(cè)。
再現(xiàn)性又稱實(shí)驗(yàn)室間精密度,表示上述影響因素變化最大的情況,即不同地點(diǎn)、不同操作者、不同設(shè)備。
重復(fù)性和再現(xiàn)性是精密度的兩種極端情形,在這兩種極端情形之間的精密度,稱為中間精密度(相同地點(diǎn)、不同時(shí)間、其他影響因素亦可發(fā)生變化),日間精密度,設(shè)備內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度均屬于中間精密度。
應(yīng)選擇包括弱陽性和陰性的至少兩個(gè)分析物濃度水平樣本進(jìn)行精密度研究。在每個(gè)適用機(jī)型上進(jìn)行重復(fù)性、日間精密度和批間差的研究,同時(shí)根據(jù)影響因素的重要性分析,采用主機(jī)型進(jìn)行中間精密度和/或再現(xiàn)性研究。
建議選擇典型或臨床常見型別樣本進(jìn)行精密度研究。對(duì)于多項(xiàng)聯(lián)檢試劑產(chǎn)品,尤其是核酸和染色體檢測(cè)試劑,一般可根據(jù)產(chǎn)品設(shè)計(jì)原理,每一反應(yīng)體系選擇易錯(cuò)或代表性樣本進(jìn)行研究。應(yīng)闡述研究位點(diǎn)選擇依據(jù),明確樣本的來源、濃度和性質(zhì)確定方法。
3.2臨界值水平的精密度研究
除上述精密度研究外,建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的臨界值進(jìn)行確定(如適用),并采用該濃度/水平樣本進(jìn)行精密度研究。此處所述臨界值水平不同于通過ROC曲線等方法確定的陽性判斷值。理想情況下,臨界值濃度水平,即為多次重復(fù)試驗(yàn)時(shí),50%的結(jié)果為陰性,50%的結(jié)果為陽性濃度水平,在本文以C50表示。
建議采用C5~C95區(qū)間描述分析物濃度接近C50的樣本重復(fù)檢測(cè)的不精密度。
首先建立C50濃度,并通過對(duì)該濃度水平樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè),以對(duì)C50濃度進(jìn)行確認(rèn)。而后以各濃度水平樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)的方式,判斷某一特定可接受范圍,如C50±20%,是否包含了C5~C95區(qū)間。如果-20%至+ 20%的濃度范圍包含了C5~C95區(qū)間,則可以認(rèn)為距離C50點(diǎn)達(dá)20%或以上的樣本可產(chǎn)生一致的結(jié)果; 即在C5~C95以外的樣本的結(jié)果是精密的,此時(shí)試劑精密度可接受。申請(qǐng)人可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn),設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn),并詳述設(shè)定依據(jù)。對(duì)于可給出量值數(shù)據(jù)的定性檢測(cè)試劑,如OD值、Ct值,一般可依據(jù)產(chǎn)品的臨床預(yù)期用途、方法學(xué)自身的準(zhǔn)確度、生物學(xué)變異、靶物質(zhì)的特性等設(shè)定產(chǎn)品的精密度可接受范圍。
申請(qǐng)人可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn),設(shè)置合理的(單側(cè)或雙側(cè))置信度水平,采用合理的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。推薦對(duì)C50±20%兩個(gè)濃度水平分別重復(fù)進(jìn)行40次檢測(cè),當(dāng)+20%濃度水平全部為陽性,-20%濃度水平全部為陰性時(shí),得出-20%到+ 20%濃度范圍包含C5~C95區(qū)間的置信度>80%。
4.分析靈敏度
4.1 檢出限
一般采用檢出限(LOD)指標(biāo)來體現(xiàn)申報(bào)試劑的分析靈敏度。檢出限的驗(yàn)證試驗(yàn),應(yīng)采用不少于三批試劑進(jìn)行,且研究應(yīng)持續(xù)多天。如果試劑具有多個(gè)適用機(jī)型,應(yīng)至少對(duì)主機(jī)型進(jìn)行LOD的建立和驗(yàn)證,對(duì)其他適用機(jī)型,可僅進(jìn)行LOD的驗(yàn)證。
可給出連續(xù)量值信號(hào)的定性檢測(cè)試劑,如基于酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)的檢測(cè)試劑采用吸光度響應(yīng)區(qū)別“陽性”和“陰性”結(jié)果。對(duì)于此類檢測(cè)的檢出限設(shè)置,可參考《定量檢測(cè)試劑性能評(píng)估注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》中相關(guān)內(nèi)容,設(shè)定空白限和LOD。注意:這不適用于臨界值遠(yuǎn)高于檢出限的檢出項(xiàng)目。
4.1.1LOD的建立
建議采用對(duì)已知待測(cè)物濃度的樣本進(jìn)行系列稀釋后重復(fù)檢測(cè)的方法,確定申報(bào)試劑的檢出限。在上述重復(fù)檢測(cè)過程中,記錄不同稀釋度/濃度檢出(或陽性)的結(jié)果。采用適當(dāng)?shù)幕貧w模型(如Probit分析)和各待測(cè)物濃度進(jìn)行擬合,計(jì)算申報(bào)試劑在設(shè)定概率下的檢出限,一般在該檢測(cè)濃度下應(yīng)具有95%的可能性檢出。
對(duì)于染色體檢測(cè)試劑,需要考慮不同嵌合比例的檢出情況(如適用)。
對(duì)于線粒體突變檢測(cè)試劑和腫瘤基因突變檢測(cè)試劑,應(yīng)考慮特定核酸濃度下,不同突變比例的檢出情況下的LOD(如適用)。
對(duì)于病原體檢測(cè)試劑,評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)納入代表型別,分別計(jì)算每個(gè)型別的LoD,并取最大值作為整個(gè)檢測(cè)試劑的LOD。對(duì)于罕見的型別,應(yīng)在后續(xù)的檢出限驗(yàn)證試驗(yàn)中進(jìn)行確認(rèn)。
人類基因突變(胚系突變)或基因多態(tài)性檢測(cè)試劑,應(yīng)包含對(duì)型別為雜合子的樣本進(jìn)行LOD(核酸濃度)研究。
4.1.2 LOD的驗(yàn)證
申報(bào)試劑應(yīng)在檢測(cè)限濃度水平對(duì)常見分析物型別進(jìn)行驗(yàn)證,一般采用對(duì)檢出限濃度水平樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)試驗(yàn)的方法對(duì)檢出限進(jìn)行驗(yàn)證。申請(qǐng)人應(yīng)能夠提供用于檢出限驗(yàn)證的各個(gè)樣本的來源、型別及濃度確認(rèn)方法信息。
4.2 包容性(Inclusivity)
對(duì)于病原體檢測(cè)試劑和部分人基因檢測(cè)試劑,應(yīng)證明申報(bào)試劑具有檢出不同型別待測(cè)病原體/不同基因型的能力。包括已知型別(中國人群)、病原體的亞群(組)和血清型。應(yīng)采用略高于檢出限濃度的各型別樣本進(jìn)行研究。該樣本可以為滅活的臨床樣本或標(biāo)準(zhǔn)菌株/毒株。對(duì)于罕見的型別可根據(jù)推薦度依次選用:假病毒(病原體檢測(cè)適用)、細(xì)胞株(人基因檢測(cè)適用)>人工克隆或合成的DNA或RNA。應(yīng)提供各個(gè)研究樣本的來源、性質(zhì)確定方法及濃度等信息。
5. 分析特異性
5.1干擾試驗(yàn)
申請(qǐng)人應(yīng)分析樣本本身和樣本使用過程中潛在的干擾物質(zhì),確定干擾物濃度/水平和干擾試驗(yàn)的接受標(biāo)準(zhǔn),采用配對(duì)比對(duì)等方式進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。
5.1.1常見干擾物質(zhì)
樣本中包含的內(nèi)源性和外源性干擾物質(zhì):如病理狀態(tài)下的人體代謝產(chǎn)物和異常升高物質(zhì)(如膽紅素、免疫球蛋白、脂蛋白、細(xì)胞因子、自身抗體)、生理?xiàng)l件變化下尿液的不同pH值、藥物及其代謝產(chǎn)物、人體常見攝入物質(zhì)(如飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充劑、食物)、采樣部位常見物質(zhì)(如漱口水)等。
樣本采集和處理過程中引入的干擾物質(zhì):如紅細(xì)胞裂解產(chǎn)生血紅蛋白、白細(xì)胞裂解產(chǎn)生的鉀離子、樣本添加劑如抗凝劑和防腐劑等。
另外,依據(jù)產(chǎn)品預(yù)期人群,應(yīng)考慮不同人群可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的影響,一般包括嬰幼兒、孕婦、腫瘤患者、血液疾病患者。
5.1.2干擾試驗(yàn)方法
一般可采用配對(duì)比對(duì)的方式,比較干擾樣本和不包含或含正常濃度水平干擾物樣本檢測(cè)結(jié)果間差異。如果差異超出接受范圍,應(yīng)進(jìn)一步研究該干擾物質(zhì)的濃度水平。
干擾樣本可選擇臨床真實(shí)樣本或采用人工添加高濃度干擾物的形式制備。干擾物終濃度應(yīng)選擇臨床可預(yù)期最高濃度(“最差條件”)。
建議采用包含弱陽性樣本在內(nèi)的至少兩個(gè)靶物質(zhì)濃度水平的樣本進(jìn)行干擾研究。
申請(qǐng)人可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn),設(shè)置合理的結(jié)果接受標(biāo)準(zhǔn),并詳述設(shè)定依據(jù)。對(duì)于可給出量值數(shù)據(jù)或計(jì)數(shù)結(jié)果的定性檢測(cè)試劑,如OD值、Ct值,一般可依據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、生物學(xué)變異等設(shè)定產(chǎn)品的可接受范圍。
5.2交叉反應(yīng)研究
5.2.1常見交叉反應(yīng)物質(zhì)
一般包括分析物的結(jié)構(gòu)類似物、具有同源性序列的核酸片段、檢測(cè)范圍外的型別;易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、相同或相似的臨床癥狀出現(xiàn)時(shí),體內(nèi)易升高的其他蛋白;采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物,包含近緣微生物。
還應(yīng)考慮到由于產(chǎn)品原材料設(shè)計(jì)可能引入的交叉反應(yīng)。如病原體抗體檢測(cè)試劑采用基因重組抗原,應(yīng)增加對(duì)異源物質(zhì)如重組基因及表達(dá)宿主的特異性抗體的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià);如采用小鼠源性單克隆抗體作為主要原材料,應(yīng)注意HAMA可能對(duì)檢測(cè)造成的影響。
5.2.2研究方法
建議選擇高濃度交叉反應(yīng)物水平進(jìn)行驗(yàn)證,細(xì)菌或者真菌的最低濃度為106 CFU/mL;病毒的最低濃度為105PFU/mL;人野生型DNA至少包含1000 ng/μL野生核酸樣本。應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體的制備方法、來源、種屬和濃度信息;應(yīng)提供所有基因型序列的來源、序列和濃度信息。
對(duì)于核酸檢測(cè)試劑,當(dāng)遇交叉反應(yīng)物難以獲得,如病原體難以培養(yǎng)或基因型頻率低時(shí),可采用核酸樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。此時(shí)應(yīng)將核酸樣本視為實(shí)際使用過程中參與檢測(cè)反應(yīng)的核酸樣本,根據(jù)說明書的要求配制反應(yīng)體系,進(jìn)行檢測(cè)。
對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)試劑,用于交叉反應(yīng)研究的抗體類型應(yīng)與待測(cè)目的的抗體類型相同,如檢測(cè)病原病原體特異性IgG抗體,應(yīng)研究與其他相關(guān)病原體特異性IgG抗體的交叉反應(yīng)。
6.高劑量鉤狀效應(yīng)
對(duì)于部分免疫學(xué)的產(chǎn)品,含有極高濃度的待測(cè)抗體/抗原檢測(cè)時(shí),飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測(cè)濃度值低于真實(shí)值或出現(xiàn)假陰性結(jié)果。此時(shí)應(yīng)評(píng)估是否存在鉤狀效應(yīng)及其影響。
建議對(duì)含有高濃度或滴度分析物的樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度,每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)多份檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證,并明確不產(chǎn)生高劑量鉤狀效應(yīng)/前帶效應(yīng)的最高濃度或滴度。
7.陽性判斷值
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)詳細(xì)說明陽性判斷值確定的方法或依據(jù),采用樣本的來源與組成,確定臨床診斷信息的方法并提交陽性判斷值建立的研究資料。
建議使用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的受試者樣本,樣本為包含一定比例的陰、陽性樣本的有代表性的目標(biāo)人群樣本,應(yīng)充分考慮到地域性、季節(jié)、不同感染階段/腫瘤分期和生理狀態(tài)等的影響因素。推薦采用受試者工作特征曲線(ROC)的方法確定陽性判斷值。此方法適用于可給出量值/信號(hào)值或計(jì)數(shù)值的定性檢測(cè)試劑??墒褂门R床診斷信息進(jìn)行陰陽性判定,但注意此臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)必須可靠。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析存在灰區(qū),應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。
8.方法學(xué)比對(duì)
對(duì)于免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑,申請(qǐng)人還應(yīng)按照《免于進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)的體外診斷試劑方法學(xué)比對(duì)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)評(píng)估并提交研究資料。
對(duì)于預(yù)期用途為病原體感染輔助診斷的檢測(cè)試劑,建議額外采用轉(zhuǎn)換盤進(jìn)行診斷靈敏度的研究。
9.其他
9.1核酸提取
對(duì)于核酸檢測(cè)試劑,不同的核酸提取方法直接影響待測(cè)核酸的質(zhì)量與濃度水平,因此,此類試劑應(yīng)進(jìn)行核酸提取性能研究。申請(qǐng)人可通過對(duì)比不同提取方法的提取效率、提取重復(fù)性和抗干擾能力,選擇申報(bào)產(chǎn)品配套使用的核酸提取方法/試劑。
若申報(bào)試劑聲稱適用兩種或以上核酸提取方法/試劑,則應(yīng)對(duì)選定的每一種核酸提取方法/試劑性能進(jìn)行驗(yàn)證,一般而應(yīng),應(yīng)至少包含對(duì)LoD和精密度的驗(yàn)證,此處精密度應(yīng)參考本文此前關(guān)于再現(xiàn)性的研究要求。
9.2免疫反應(yīng)性
對(duì)于免疫組織化學(xué)抗體試劑及檢測(cè)試劑,應(yīng)提交一批試劑對(duì)正常人體組織和非正常組織,每種組織類型不少于3例的免疫反應(yīng)性研究。評(píng)價(jià)陰/陽性表達(dá)情況并描述著色位置及染色特點(diǎn)。一般而言,非正常組織包括:相關(guān)良性、惡性病變組織和經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道可能出現(xiàn)陽性表達(dá)的惡性病變組織。
9.3基于原位雜交方法的檢測(cè)試劑的其他性能評(píng)估
此類試劑,常需進(jìn)行雜交效率以及探針特異性的研究。
雜交效率用于評(píng)價(jià)試劑中探針結(jié)合靶序列的能力。該研究建議使用中期分裂相的外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行涂片分析。雜交效率的研究應(yīng)考慮不同判讀者差異的影響。對(duì)于檢測(cè)特定腫瘤細(xì)胞中目標(biāo)序列的檢測(cè)試劑,還應(yīng)選擇相關(guān)腫瘤組織樣本進(jìn)行雜交效率的研究。
探針特異性通過特異雜交到染色體正確位置的雜交信號(hào)占全部雜交信號(hào)的比例來表示。該研究建議使用中期分裂相的外周血淋巴細(xì)胞涂片分析,選擇來源于不同人體的細(xì)胞,對(duì)至少200個(gè)靶位點(diǎn)進(jìn)行分析計(jì)數(shù),研究應(yīng)結(jié)合顯帶技術(shù)進(jìn)行觀察。同時(shí)如果研究出現(xiàn)交叉雜交,應(yīng)考慮靶序列與交叉雜交序列的同源性程度,是否存在其他相似染色體異常類型等問題。
建議該類產(chǎn)品分析性能評(píng)估參照相應(yīng)的審查指導(dǎo)原則進(jìn)行。
一般應(yīng)有研究方案和研究報(bào)告,清晰描述研究目的,試驗(yàn)地點(diǎn)和方法,試驗(yàn)采用的具體試劑名稱、規(guī)格和批次,儀器名稱和型號(hào),樣本類型、來源、處理方法、基質(zhì)類型及背景信息等,體現(xiàn)結(jié)果數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析過程及結(jié)果。
分析性能評(píng)估的結(jié)果應(yīng)在產(chǎn)品說明書中進(jìn)行描述,合理聲稱產(chǎn)品性能。
1. 準(zhǔn)確度:被分析物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果與真實(shí)結(jié)果之間的接近程度。
2. 陽性判斷值:又稱臨界值,用于鑒別樣品,作為判斷特定疾病、狀態(tài)或被測(cè)量存在或不存在的界限的量值。對(duì)于定性試驗(yàn),高于此閾值的結(jié)果報(bào)告為陽性,而低于此閾值的結(jié)果報(bào)告為陰性。
3. C50(50%濃度):接近臨界值的分析物濃度,多次重復(fù)檢測(cè)此濃度的單一樣本時(shí)將獲得50%的陽性結(jié)果和50%的陰性結(jié)果。
4. C5~C95區(qū)間:臨界值附近的分析物濃度,可認(rèn)為此濃度區(qū)間之外的分析物檢測(cè)結(jié)果始終為陰性(濃度<C5)或始終為陽性(濃度>C95)
5. 診斷準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn):使用一種方法或聯(lián)合多種方法,包括實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、影像學(xué)檢測(cè)、病理和隨訪信息在內(nèi)的臨床信息,來界定狀況、事件和關(guān)注特征有無的標(biāo)準(zhǔn)。
6. 檢出限(LOD):由給定測(cè)量程序得到的測(cè)得量值,對(duì)于此值,在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α?xí)r,聲稱不存在該成分的誤判概率為β。
注1:對(duì)于分子測(cè)量程序,指持續(xù)檢出的最低分析物濃度。(通常是指常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室條件下,特定樣本類型>95%檢出率。)
7. 包容性(Inclusivity):指檢測(cè)試劑可以對(duì)預(yù)期范圍內(nèi)的靶物質(zhì)檢出的能力。
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