貼敷類醫(yī)療器械在我國(guó)乃至全球有久長(zhǎng)的應(yīng)用歷史，也是當(dāng)今無源醫(yī)療器械中的重要類目。國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布貼敷類醫(yī)療器械中17種化學(xué)藥物識(shí)別及含量測(cè)定補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的公告（2022年第12號(hào)），對(duì)醫(yī)療器械注冊(cè)有重要指導(dǎo)意義。
貼敷類醫(yī)療器械在我國(guó)乃至全球有久長(zhǎng)的應(yīng)用歷史，也是當(dāng)今無源醫(yī)療器械中的重要類目。國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于發(fā)布貼敷類醫(yī)療器械中17種化學(xué)藥物識(shí)別及含量測(cè)定補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的公告（2022年第12號(hào)），對(duì)醫(yī)療器械注冊(cè)有重要指導(dǎo)意義。
貼敷類醫(yī)療器械中17種化學(xué)藥物識(shí)別及含量測(cè)定補(bǔ)充檢驗(yàn)方法
1 適用產(chǎn)品范圍
本方法適用于以物理升溫、物理退熱、穴位壓力刺激或者磁場(chǎng)作用等原理的貼敷類醫(yī)療器械。品名舉例：遠(yuǎn)紅外治療貼、醫(yī)用冷敷貼、醫(yī)用退熱貼、冷敷凝膠、磁療貼、穴位壓力刺激貼等。
本方法不適用于以鐵粉氧化升溫致熱為工作原理的熱療貼、熱灸貼等產(chǎn)品。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。
3 通則
3.1本方法中的室溫，如無特殊規(guī)定，應(yīng)為10 ℃～30 ℃。
3.2本方法中試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T 6682的要求。
3.3本方法中所用容器如無特殊規(guī)定，應(yīng)為硅硼酸鹽玻璃容器。
3.4本方法中所涉及的量取，應(yīng)使用符合相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的準(zhǔn)確度要求的移液管量取。
4 測(cè)定方法
4.1 概述
高效液相色譜儀的二極管陣列檢測(cè)器（DAD）能夠進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，靈敏度較高，且應(yīng)用普遍、易于操作。高分辨的一級(jí)（MS）、二級(jí)質(zhì)譜（MS2）數(shù)據(jù)能夠給出更加準(zhǔn)確可靠的結(jié)構(gòu)信息。本方法采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行初篩，高分辨液質(zhì)聯(lián)用法（HRMS/MS）或等效的液質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證后的陽性樣品采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行含量測(cè)定。
4.2 供試液的制備
取樣品1貼，撕開不粘層，展開，貼在定量濾紙上，用剪刀裁去多余濾紙，然后將樣品剪成0.5 cm×0.5 cm的小片，置于150 mL燒瓶中，加入甲醇適量將樣品完全浸沒，70 ℃回流兩次，每次2 h。將浸提液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用少量甲醇洗滌樣品三次，合并洗滌液至容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻。取上述溶液經(jīng)0.2 μm微孔濾膜過濾后作為供試液，必要時(shí)可進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋。
4.3高效液相色譜法
4.3.1 儀器與試劑
4.3.1.1 儀器
高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器。
4.3.1.2 試劑
a）甲醇：色譜純，CAS# 67-56-1；
b）乙腈：色譜純，CAS# 75-05-8；
c）磷酸：分析純，CAS# 7664-38-2；
d）17種藥物信息見表1。
表1 17種藥物信息
編號(hào) | 名稱 | CAS號(hào) | 分子式 |
1 | 氨基比林 | 58-15-1 | C13H17N3O |
2 | 甲氧芐啶 | 738-70-5 | C14H18N4O3 |
3 | 對(duì)乙酰氨基酚 | 103-90-2 | C8H9NO2 |
4 | 潑尼松 | 53-03-2 | C21H26O5 |
5 | 氫化可的松 | 50-23-7 | C21H30O5 |
6 | 地塞米松 | 50-02-2 | C22H29FO5 |
7 | 水楊酸甲酯 | 119-36-8 | C8H8O3 |
8 | 醋酸潑尼松 | 125-10-0 | C23H28O6 |
9 | 醋酸可的松 | 50-04-4 | C23H30O6 |
10 | 酮洛芬 | 22171-81-5 | C16H14O3 |
11 | 萘普生 | 22204-53-1 | C14H14O3 |
12 | 醋酸地塞米松 | 1177-87-3 | C24H31FO6 |
13 | 保泰松 | 50-33-9 | C19H20N2O2 |
14 | 氟比洛芬 | 5104-49-4 | C15H13FO2 |
15 | 布洛芬 | 15687-27-1 | C13H18O2 |
16 | 吲哚美辛 | 53-86-1 | C19H17ClNO4 |
17 | 雙氯芬酸鈉 | 15307-79-6 | C14H10Cl2NNaO2 |
4.3.2藥物對(duì)照品儲(chǔ)備溶液的配制
分別取4.3.1.2中17種藥物對(duì)照品各約10 mg，精密稱定，置10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解后定容，搖勻，配制成濃度為1 mg/mL的藥物對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。
4.3.3高效液相色譜條件（推薦）
4.3.3.1色譜柱：XBridge BEH Shield RP18 2.5 μm4.6×150 mm，或其他等效色譜柱。
4.3.3.2柱溫：35 ℃，樣品室溫度：10 ℃；
4.3.3.3流速：1 mL/min；
4.3.3.4檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm，掃描范圍：190 nm～400 nm；
4.3.3.5進(jìn)樣量：10 μL。
4.3.3.6流動(dòng)相：A（pH 3.0的磷酸水溶液）B（甲醇：乙腈 1：1），梯度條件見表2。
表2 HPLC法流動(dòng)相梯度條件
時(shí)間（min） | A（%） | B（%） |
0 | 94 | 6 |
8 | 45 | 55 |
20 | 45 | 55 |
25 | 10 | 90 |
26 | 10 | 90 |
26.5 | 94 | 6 |
30 | 94 | 6 |
4.3.4系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
4.3.4.1 分離度
取4.3.2中17種藥物對(duì)照品儲(chǔ)備溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成濃度為10 mg/L的混合對(duì)照溶液，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，17種對(duì)照品的色譜峰與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。
4.3.4.2 靈敏度
取4.3.2中17種藥物對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，分別用甲醇稀釋至表3中“檢出限（LOD）”的濃度，取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，17種對(duì)照品的色譜峰信噪比（S/N）均應(yīng)大于3:1。
表3 17種藥物靈敏度要求
編號(hào) | 名稱 | 檢出限LOD （mg/L） |
1 | 氨基比林 | 1.5 |
2 | 甲氧芐啶 | 0.2 |
3 | 對(duì)乙酰氨基酚 | 0.2 |
4 | 潑尼松 | 0.2 |
5 | 氫化可的松 | 0.2 |
6 | 地塞米松 | 0.2 |
7 | 水楊酸甲酯 | 0.5 |
8 | 醋酸潑尼松 | 0.5 |
9 | 醋酸可的松 | 0.5 |
10 | 酮洛芬 | 0.2 |
11 | 萘普生 | 0.05 |
12 | 醋酸地塞米松 | 0.5 |
13 | 保泰松 | 0.5 |
14 | 氟比洛芬 | 0.5 |
15 | 布洛芬 | 0.5 |
16 | 吲哚美辛 | 0.5 |
17 | 雙氯芬酸鈉 | 0.2 |
4.4高分辨液質(zhì)聯(lián)用法
4.4.1 儀器與試劑
4.4.1.1 儀器
高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀
4.4.1.2 試劑
a）甲醇：質(zhì)譜純，CAS# 67-56-1；
b）乙酸銨：質(zhì)譜純，CAS# 631-61-8；
c）17種藥物對(duì)照品同4.3.1.2 d）。
4.4.2對(duì)照品溶液配制
同4.3.4.1中濃度為10 mg/L的混合對(duì)照溶液配制。
4.4.3色譜條件（示例）
4.4.3.1色譜柱：Hypersil Gold 100×2.1 mm 1.9 μm，或其他等效色譜柱。
4.4.3.2 柱溫：40 ℃，樣品室溫度：10 ℃；
4.4.3.3 流速：0.2 mL/min；
4.4.3.4 檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；
4.4.3.5進(jìn)樣量：2 μL。
4.4.3.6 流動(dòng)相：A（10 mmol/L乙酸銨的水溶液）B（甲醇），梯度條件見表4。
表4 HPLC-HRMS/MS法流動(dòng)相梯度條件
時(shí)間（min） | A （%） | B （%） |
0 | 90 | 10 |
1 | 90 | 10 |
7 | 5 | 95 |
11 | 5 | 95 |
12 | 90 | 10 |
15 | 90 | 10 |
4.4.4質(zhì)譜條件（示例）
4.4.4.1 儀器型號(hào)：Themo Q-Exactive Focus型高分辨液質(zhì)聯(lián)用儀。
4.4.4.2 離子源：ESI掃描模式：正負(fù)切換；
4.4.4.3 鞘氣：30 arb輔助氣：8 arb 吹掃氣：0 arb；
4.4.4.4 電噴霧電壓：3.0 kV；
4.4.4.5 毛細(xì)管溫度：320 ℃；
4.4.4.6 傳輸透鏡電壓：55.0 %；
4.4.4.7 輔助氣加熱溫度：300 ℃；
4.4.4.8 17種藥物測(cè)定參數(shù)見表5。
表5 17種藥物檢測(cè)模式、二級(jí)能量及碎片離子
編號(hào) | 名稱 | 檢測(cè) 模式 | m/z | 碎片信息 | 能量（NCE） |
1 | 氨基比林 | ﹢ | 232.1444 | 113*,139,187,217 | 20 |
2 | 甲氧芐啶 | ﹢ | 291.1452 | 123*,201,245,261,275 | 50 |
3 | 對(duì)乙酰氨基酚 | ﹢ | 152.0706 | 65,92,110*,134 | 50 |
4 | 潑尼松 | ﹢ | 359.1853 | 147*,237,313,341 | 25 |
5 | 氫化可的松 | ﹢ | 363.2176 | 97,121*,173,267,309,327,345 | 25 |
6 | 地塞米松 | + | 393.2072 | 147,237,319,337,355*,373 | 15 |
7 | 水楊酸甲酯 | ﹣ | 151.0390 | 75,91*,93,119,121 | 60 |
8 | 醋酸潑尼松 | ﹢ | 401.1959 | 147,237,295*,313,341,383 | 18 |
9 | 醋酸可的松 | ﹢ | 403.2115 | 101,163 *,325,343,361 | 25 |
10 | 酮洛芬 | ﹢ | 255.1017 | 105,177,209* | 21 |
11 | 萘普生 | ﹢ | 231.1017 | 170,185* | 20 |
12 | 醋酸地塞米松 | ﹢ | 435.2177 | 147,237,309,397*,415 | 15 |
13 | 保泰松 | ﹢ | 309.1598 | 120,146,160 *,211 | 35 |
14 | 氟比洛芬 | - | 243.0817 | 199* | 20 |
15 | 布洛芬 | ﹣ | 205.1223 | 159* | 10 |
16 | 吲哚美辛 | ﹣ | 356.0684 | 111,297,312* | 10 |
17 | 雙氯芬酸鈉 | ﹣ | 294.0094 | 250* | 10 |
注：*為基峰
4.5藥物識(shí)別及其含量測(cè)定
取4.2制備的供試液及4.3.4.1制備的10 mg/L的混合對(duì)照溶液，按照4.3.3的方法進(jìn)樣分析。將二者結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，以保留時(shí)間（tR）及190 nm~400 nm的紫外光譜圖一致性作為初篩依據(jù)。
取可能含有藥物的供試液及相應(yīng)藥物對(duì)照品溶液，按照4.4.3、4.4.4的方法進(jìn)樣分析。將供試液與對(duì)照品溶液的母離子及碎片離子信息進(jìn)行對(duì)比，二者一致則確認(rèn)該樣品中含有相應(yīng)的藥物成分。
取4.3.2中陽性樣品中所含藥物的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，配制成系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照4.3.3的方法進(jìn)樣分析。繪制濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)峰面積計(jì)算樣品中藥物的量。圖1給出了17種藥物的典型色譜圖。
圖1 17種藥物典型色譜圖
4.6其他藥物識(shí)別方法
本方法中給出了17種藥物的識(shí)別和含量測(cè)定方法，如關(guān)注其他可能添加的藥物，也可采用經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證的方法進(jìn)行分析。
5 結(jié)果判定
供試液中不得檢出上述17種藥物成分（檢出限見表3）。
起草單位：山東省醫(yī)療器械和藥品包裝檢驗(yàn)研究院
復(fù)核單位：深圳市藥品檢驗(yàn)研究院
安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院